 Bene ritrovati in questa seconda parte del nostro viaggio nella mondo della spettrometria di massa e che abbiamo visto non è poi tanto sconosciuta perché appunto ci accompagna nella nostra vita fin dai primi momenti dopo la nascita con lo screening neonatale, analisi dell'aria, analisi dell'acqua, analisi del cibo, sicurezza alimentare, tracciabilità nello sport, nell'analisi anti-doping, nelle analisi del laboratorio clinico, addirittura in sala operatoria, in tutte le scienze omiche, in archeologia, in moltissimi moltissimi ambiti. Abbiamo visto come l'aspetrometria di massa ha come caratteristica quella di studiare gli ioni in fase gassosa. Abbiamo visto i ioni piccoli, di piccole dimensioni, piccole molecole o ioni prodotti da molecole grandi o grandissime come molecole di milioni di peso molecolare. Abbiamo già visto come, diciamo, dopo l'introduzione del campione, la prima parte dello strumento sia la sorgente ionica e la sorgente appunte quella zona dello spettrometrio di massa dove avviene l'ionizzazione. Si formano gli ioni, le molecole sono trasformate in ioni. Una volta formati gli ioni vengono accelerati e indirizzati verso l'analizzatore, che è la seconda parte fondamentale dello spettrometrio di massa, dove vengono analizzati l'analizzatore determina il loro rapporto massa-succarica, un oione in quanto una particella carica a una massa e una carica, e l'analizzatore determina il rapporto massa-succarica. Dopodiché gli ioni continuano il loro percorso verso il rivelatore per poi appunto produrre lo spettro di massa. Abbiamo già visto che analizzatori e rivelatore devono essere sotto vuoto per far sì che gli ioni rimangano quanto più, diciamo, intatti possibili da fino, dalla sorgente fino ad arrivare alla rivelatore. Abbiamo visto ieri un pochino, diciamo, la volta scorsa e il indettaglio che come avviene l'ionizzazione e adesso rifacchiamo un po' da qui. Quindi la trasformazione di una molecola in ioni. Abbiamo visto che la molecola può interagire con un fascio di elettroni per formare quindi un cattione radicalico, lo vediamo qua. Questo cattione radicalico lo chiamiamo ionemolecolare. Ionemolecolare è perché ha la stessa massa della molecola, ha lo stesso peso della molecola ed è però un oione che ha una carica positiva perché la molecola che è neutra per definizione, se togliamo un elettrone, otteniamo appunto un cattione, quindi un oione positivo, la molecola ha elettroni pari, se ne togliamo uno, le elettrone dispari. Quindi un fascio di elettroni può ionizzare la nostra molecola. Ma la molecola può essere anche protonata e quindi possiamo aggiungere un protone con vari metodi o possiamo anche deprotonarla e quindi rimuovere un protone e formare un oione negativo. Abbiamo visto come la spettrometria di massa può, diciamo, caratterizzare sia i oni positivi sia i oni negativi. E poi abbiamo visto come una tecnica che appunto si chiama elettrosparei che vedremo un attimo tra un attimo, ha la peculiarità di formare i oni con più cariche, quindi se la molecola è sufficientemente grande si possono formare i oni con carica più 5, meno 10, più 30 a seconda della molecola che stiamo studiando. Allora le tecniche di ionizzazione possiamo dividerle in due grosse famiglie. Quelle che sono utilizzate per studiare le molecole volatili sono state le prime tecniche di ionizzazione con cui è nata la spettrometria di massa. Vi dicevo la volta scorsa che inizialmente la spettrometria di massa studia gli atomi, poi passa alle molecole, alle piccole molecole volatili per poi passare a metà degli anni 80 a studiare tutte le molecole, grandi piccole, volarie, non volarie, volatili, non volatili. E per le molecole volatili abbiamo due tecniche di ionizzazione. La prima è la ionizzazione elettronica come vedete è stata introdotta già da J. J. Thomson oltre un secolo fa. La seconda è la ionizzazione chimica. È interessante notare come la ionizzazione elettronica, introdotta più di un secolo fa, sia a tu o ad oggi la ionizzazione usata per eccellenza nella ionizzazione delle molecole volatili. Inoltre un secolo di storia di spettrometria di massa non si è trovata una ionizzazione migliore della ionizzazione elettronica. E allora vediamo come funziona questa tecnica. Allora abbiamo detto si applica le molecole volatili, quindi la molecula deve essere in fase gassosa. Le molecole volatili sono molecole che sono apolari, che non hanno gruppi acidi, non hanno gruppi basici, altrimenti formerebbero dei forti legami aerogeno che ne impedirebbero la volatilità. Per portare una molecula in fase gassosa dobbiamo scaldare e quindi la sorgenta ionizzazione elettronica ha una certa temperatura a 250 gradi per esempio, quindi le molecole devono essere anche termicamente stabili. E poi oltre ad essere volatili devono anche essere a basso peso molecolare, molecole volatili hanno un peso molecolare 500, 600, massimo milledalto, non oltre. Come vengono ionizzate nella ionizzazione elettronica? Abbiamo già visto quindi che è un fascio di elettroni che si avvicina alla molecula, un fascio di elettroni che è prodotto da un filamento a cui appliciamo un potenziale di 70 electron volt e qua vedete alcuni dei filamenti utilizzati, vedete bene qui c'è un filamento, applicando a questi due piedini un potenziale, una corrente, questo filamento diventa incandescente e mette elettroni. Questi elettroni vengono attratti da un polo positivo che è l'anodo che vedete in fronte e dietro al filamento e dietro all'anodo mettiamo il polo di due magnete per farsi che il movimento degli elettroni sia un movimento di tipo circolare, quindi gli elettroni si muovono da una parte all'altra della sorgente e interagiscono con la nostra molecula. Per spiegare questa interazione sono solito fare l'esempio del treno, immaginate che una persona con i capelli lunghi sia per esempio alla stazione sul binario aspettando il treno passa un treno ad altissima velocità. Cosa succede? Parte della sua energia viene trasferita alle molecole dell'aria che la trasferiscono ai capelli e i capelli si muovono e è un'interazione a distanza fortunatamente e anche nel caso della ionizzazione elettrone che è un'interazione a distanza, un fascio di elettroni passa vicino alla molecula e trasferisce prende parte della sua energia alla molecula producendo appunto la ionizzazione e quindi come abbiamo visto appunto si forma l'oione molecolare quindi una mole un'oione positivo radicalico che ha lo stesso peso della nostra molecula perché la differenza è soltanto un elettrone e come sapete un elettrone ha un peso trascurabile allora è come se noi avessimo la nostra molecula qui rappresentata da un bicchiere, lo portiamo in fase gasosa, lo facciamo volare interagisce con qualcosa e in quest'interazione l'energia trasferita è sufficientemente grande da poter lo rompere e allora ecco che abbiamo l'ospetto di massa che è qui rifortato dove vedete ci sono tanti picchi ciascun picco che lo risponde a un'oione sulle acissero il rapporto massasuccarica che abbiamo visto viene determinato dall'analizzatore nelle ordinate o invece l'abundanza relativa degli ioni rapportata al 100% che è determinata dal rivelatore quindi in uno spettro di ionizzazione elettronica abbiamo molti frammenti perché questa interazione tra elettroni e molecula porta non solo alla ionizzazione ma una volta che si forma l'oione molecolare questo si rompe e quindi produce dei frammenti che erano dei valori di m su z più piccoli ovviamente dell'oione molecolare quindi l'oione molecolare sarà l'oione più a destra nello spettro e i frammenti saranno alla sua sinistra i frammenti sono fondamentali per determinare una delle proprietà che abbiamo visto ieri cioè la struttura con l'aspetto metria di massa possiamo determinare la struttura di una molecula e per fare questo abbiamo bisogno dello studio dei frammenti in uno spettro di massa e quindi studiando i frammenti riusciamo a ricostruire l'immagine e come se quando quel bicchiere era intatto io fossi stato avusi avuso gli occhi vendati dopo di che il bicchiere si rompe apro gli occhi vedo un sacco di frammenti mi metto lì con la colla piano piano li rimetto insieme ed ecco che riottengo vedo veramente come era il mio bicchiere all'inizio quindi i frammenti sono estremamente utili per poter determinare la struttura della nostra molecula e allora vediamo uno spettro di massa di ionizzazione elettronica l'avete qui rifortato quindi il rapporto massa su carica è inascisse l'intensità relativa degli ioni è nelle ordinate e qua vedete subito m su z a 16 16 che cos'è e 16 è una molecula molto piccola perché pesa molto poco e parliamo diciamo di molecole organiche quindi ci sarà un atomo di carbonio il carbonio pesa 12 ad arrivare a 16 mancano quattro unità quindi ci saranno quattro atomi di idrogeno quindi sarà c a 4 che è appunto il metano e vedete quindi questo a 16 e l'oione moleculare del metano e chi sarà l'oione a m su z a 15 la differenza è una unità e quindi non può essere che lo che l'oione 15 è dovuto all'oione moleculare che frammentando perde un atomo di idrogeno e forma l'oione c a 3 più che è appunto un rapporto m su z a 15 14 si perderà un ulteriori idrogeno e così via quindi abbiamo diciamo interpretato il nostro primo spettro di ionizzazione elettronica ma se la molecula è molto più complessa del metano come per esempio in questo caso questa è la molecula del colesterolo a tutti in l'orinota perché tra l'altro lo abbiamo all'interno del nostro organismo vedete da l'oione moleculare 386 da cui ricaviamo il peso moleculare della appunto molecula del colesterolo e tutta questa serie di frammenti ci sono estremamente utili per poterne definire la struttura che come vedete è abbastanza complessa rispetto appunto a quella del metano bene l'ionizzazione chimica è analoga all'ionizzazione elettronica la differenza è che l'ionizzazione chimica non produce frammenti quindi ionizza la nostra molecula volatile soltanto senza produrre dei frammenti ma vediamo al campo delle molecole invece folari molecole folari quindi molecole piccole molecole grandi delle ar degli acidi delle basi dei peptidi del DNA RNA proteine zuccheri tutto quello che vi viene in mente che è una molecula polare grande piccola che sia e in questo ambito appunto hanno fatto fanno la parte del leone due tecniche di ionizzazione che come vedete sono state introdotte molto più recentemente rispetto alla ionizzazione elettronica l'elettro spray e il maldi queste sono le due tecniche di ionizzazione che fanno diciamo la parte del leone nella ionizzazione delle molecole polari e queste due tecniche di ionizzazione sono molto importanti e sono state riconosciute come premio Nobel per la chimica nel 2002 a John Fenn per l'introduzione dell'elettro spray e a Koichi Tanaka per l'introduzione del maldi e come vedete dalle motivazioni per lo studio delle macromolecole biologiche quindi elettro spray e maldi possono studiare le molecole polari non solo le molecole piccole ma anche le molecole grandi o molto grandi e allora l'elettro spray come funziona l'elettro spray già il nome stesso vedete ci è molto explicativo elettro spray quindi c'è uno spray per produrre uno spray devo lo so bene come si fa perché siamo soliti usare del profumo della lacca del dopobarba e allora per produrre uno spray del profumo abbiamo una bottiglia dove c'è un tubicino estremamente piccolo all'interno del quale passa un liquido e quindi appiggiando diciamo il bottone sul sul sulla bottiglia avrò la formazione di goccioline molto piccole che appunto costituiscono uno spray che poi vanno ad appoggiarsi appunto ad agiarsi su da mia pelle e quindi in questo caso però abbiamo nel caso del profumo nel caso del dopobarba nel caso della lacca abbiamo nel liquido nella bottiglia molecole e nello spray abbiamo molecole ma qui noi non vogliamo avere molecole perché la spettrometria di massa studia gli ioni quindi abbiamo bisogno di ionizzare e allora ecco che al capillare attraverso il quale passa la soluzione del nostro campione appichiamo un campo elettrico generalmente tra il kilo volt quattro kilo volt quindi tra i mila quattro mila volts è il potenziale che appliciamo questo fa sì che per il fetto del capillare si formeranno delle goccioline molto piccole si formeranno uno spray per il fetto del potenziale queste goccioline conterranno i nostri ioni questo le goccioline si formano appressionato atmosferica attraverso qui c'è un foro attraverso questo foro gli ioni entrano nella zona dove c'è il vuoto e dove appunto ci sarà l'analizzatore verranno analizzati e poi il rivelatore nella annualizzazione elettro spray non potevo non farvi vedere diciamo degli spettri elettro spray di ampliconi di tre coronavirus che interessano l'uomo il primo alla sars e gli altri due sono vius dell'influenza dove vedete ci sono questi trend di acidi nucleici pesi moleculari circa 280 mila 270 mila e vedete che ciascun vius ha degli trend diversi dagli altri quindi da un semplice spettro di massa è possibile poter identificare di quale colorna vius si tratta ancora non sono stati pubblicati gli spettri del covid 19 ma vedete lo saranno molto presto si diceva macro molecole quindi molecole molto grandi allora questo è uno spettro vi ho fatto vedere la volta scorsa uno spettro elettro spray di una proteina che è molto grande che ha un peso molecolare di circa un milio oltre un milione di dalton la ionizzazione mal di invece non opera su un liquido quindi non abbiamo il nostro campione in soluzione come invece avviene nell'elettro spray ma il nostro campione è un solido è un solido e anche qui il nome stesso è molto esplicativo lo vedete matrix assisted laser desorption quindi la ionizzazione prodotta da un fascio laser quindi ci sono dei fotoni prodotti da un laser che vanno a impattare sul nostro campione che ha lo stato solido ed è un matrix assisted cioè abbiamo il nostro campione è immerso da in una matrice in una sostanza che introduciamo che fa da matrice la cui funzione quella di assorbire l'energia del fascio laser quindi il laser ionizza la matrice la matrice ionizzata ionizza il nostro campione e vedete dall'impatto del laser sul complesso appunto matrice analita decollano partono in fase gassosa questi aggregati formati da ioni da molecole da matrici da analita e poi alla fine in fase gassosa abbiamo gli ioni quindi si passa da molecole in fase solida a ioni in fase gassosa nell'elettro spray abbiamo visto invece si parte da molecole in soluzione quindi in fase liquida per poi andare a ioni in fase gassosa e anche il maldi appunto è in grado di ionizzare molecole piccole ma molecole anche molto grandi qui vedete o sono diverse proteine e vedete i pesi molecolari 48 mila 70 mila 120 mila e così via quindi siamo su pesi molecolari bassi ma anche pesi molecolari molto molto alti sulla sorgente allora abbiamo visto più o meno come si fa a produrre un oione quindi si può formare un oione molecolare se la molecola è volati le con la ionizzazione elettronica o ioni positivi molecole protonate o deprasonate con elettro spray e maldi una volta formati gli goni in sorgente dobbiamo determinare il loro rapporto massa su carica e quindi lo scò chi fa questa operazione è appunto l'analizzatore che è la parte successiva alla sorgente quindi nell'analizzatore avviene la separazione degli goni secondo il loro rapporto massa su carica dicevamo già alla volta scorsa come gli analizzatori utilizzano diciamo tre forze fondamentali per poter analizzare gli goni che sono quelle forze che influenzano il movimento degli goni e in particolare abbiamo già visto il campo elettrico il campo magnetico e la radiofrequenza quindi nell'analizzatore indifendenemente da quale sia avremo una due o tre di queste forze che servono appunto vengono impiegate per poter determinare il rapporto massa su carica degli goni allora gli analizzatori possono essere suddivisi in due grandi classi come potremmo separare degli atleti per esempio beh un modo potrebbe essere quello di fargli percorre una distanza molto lunga come per esempio avviene nella maratona allora abbiamo qua moltissimi atleti che partono tutti insieme strada facendo percorrendo una certa distanza la fatica si fa sentire vengono appunto separati e quindi abbiamo gli analizzatori un gruppo di analizzatori che separano gli goni nello spazio nel caso degli analizzatori gli goni non percorrono decine di chilometri ma percorrono metri o al qualche decina di metri prima di essere appunto analizzati e tra questi notiamo gli analizzatori con cui è nata la spettrometria di massa la spettrometria di massa nasce impiegando un settore magnetico e un settore elettrostatico come analizzatori e poi abbiamo qui gli goni percorrono una distanza di circa tre quattro metri grosso modo abbiamo poi un analizzatore che storicamente si è succeduto agli analizzatori elettrostatico e magnetico che appunto il quadrofollow qui il cammino che gli goni percorrono è di circa un metro e il quadrofollow utilizza due delle triforze ovvero sia la radiofrequenza e il potenziale e poi abbiamo un terzo membro di questa classe di analizzatori che è l'analizzatori a tempo di volo in inglese time of flight l'analizzatore il top time of flight misura il tempo di volo degli goni quindi è come se fosse un cronometro un cronometro digitale che parte quando gli goni entrano e si ferma quando gli goni arrivano il tempo di volo quindi utilizza semplicemente un campo elettrico che dà appunto energia cinetica gli goni c'è poi una seconda classe di analizzatori quegli analizzatori che invece separano gli goni nel tempo perché eh beh perché in questo caso come vedete qui in figura per separare queste coppie di grandi ballerini non li facciamo percorrere chilometri e chilometri lungo un certo percorso in una certa strada ma li teniamo tutti dentro a una stanza a una stanza molto grande e si inizia la musica si inizia a ballare e col passare del tempo la fatica si fa sentire sono sempre all'interno della stanza quindi uno spazio abbastanza ristretto ma col passare del tempo si ha appunto la separazione delle varie coppie e allora ecco che i nomi di questi analizzatori sono quanto mai esplicativi analizzatori di questa classe sono la trappolaionica gli goni sono intrappolati in una regione di spazio molto piccola che vedete rappresentata da questi due analizzatori e l'analtrappolaionica utilizza le stesse forze del quadrupolo ovvero sia utilizza un campo elettrico e una radiofrequenza per separare gli goni c'è poi un altro analizzatori che è la scella risonanza ciclotronica e come vedete dalla figura anche questa è una rappresentato qui come una scatola quindi anche esso è una trappola in cui gli goni sono intrappolati e vengono appunto analizzati la scella risonanza ciclotronica utilizza tutte e tre le forze quindi utilizza un forte campo magnetico un campo elettrico e una radiofrequenza e poi abbiamo l'ultimo analizzatore introdotto nell'aspettometria di massa nel 2004 che è appunto l'orbitrap e vedete anche qui orbitrap nel nome trap c'è una trappola è una trappola orbitale quindi anche questo analizzatore intrappola gli goni vedete c'è un elettrodo centrale a cui che è incamiciato da un elettrodo esterno gli goni sono intrappolati all'interno di questi due elettrodi assumono determinati movimenti e così vengono analizzati l'orbitrap utilizza solo un campo elettrico non usa né la radiofrequenza né utilizza il campo magnetico bene una proprietà fondamentale degli analizzatori è la risoluzione allora per spiegarvela in modo semplice guardiamo questi due spettri qui vedete prima abbiamo visto degli spettri in cui gli goni erano rappresentati da dei picchi come delle linee ma i picchi possiamo rappresentarli anche appunto in forma di profilo e quindi qui avete i due spettri lo stesso spettro ho ottenuto in due modi diversi che cosa vediamo beh vediamo che questo spettro la questo picco è abbastanza largo mentre in quest'altro spettro la larghezza dei picchi è nettamente minore cioè qua i picchi sono molto più stritti rispetto che allo spettro che abbiamo alla nostra sinistra allora in questo caso sulla destra diremmo che abbiamo una risoluzione nettamente maggiore rispetto allo spettro a sinistra a cosa ci serve avere una risoluzione elevata ci serve a distinguere ioni che differiscono per il rapporto massa su carica per decimali qui guardate siamo a m su z 249 e qui ci ritroviamo questi tre ioni lo vedete che differiscono per pochi decimali nel loro rapporto di m su z e vedete questi ioni hanno tre composizioni elementari tre formule brute diverse e quindi tutti e tre hanno lo stesso rapporto massa su carica 249 ma differiscono nei decimali allora se noi abbiamo un analizzatore a bassa risoluzione otterremo questa curva nera cioè non riusciremo a distinguere le tre componenti per poterli distinguere dovremmo avere dei picchi molto stritti e quindi operare in alta risoluzione ecco allora che l'alta risoluzione la spettrometria di massa in alta risoluzione è obbligatoria nel caso delle dio sine e qui ne vedete alcuni congeneri perché è perché guardate qui in un intervallo di m su z di 0.08 unità quindi un intervallo estremamente stritto abbiamo circa una quindicina di ioni possibili e quindi se siamo obbligati ad avere dei picchi molto stritti una risoluzione abbastanza elevata perché se operassimo in bassa risoluzione otterremo questo profilo rosso che non ci permette ci permetterebbe certo di distinguere i vari componenti i vari ioni per come sono l'alta risoluzione ci permette ancora di fare una cosa molto importante non solo di distinguere ioni che differiscono nei decimali per il valore di m su z ma ci permette anche di misurare in modo accurato il valore di m su z ovvero sia di avere una significatività sperimentale sulla quarta cifra decimale cosa significa questo significa questo misurare la massa accurata quindi se io ho un analizzatore in alta risoluzione per esempio l'orbita rap per esempio il toff per esempio i settori sono tutti analizzatori in alta risoluzione io posso misurare la massa accurata cioè misuro il valore di m su z con una significatività sperimentale sulla quarta cifra decimale cosa mi permette questo questo mi permette di poter determinare la formula brusa quindi io dirò non solo che questa molecula ha peso questo ione diciamo ha un valore di m su z a 578 ma dirò anche che la sua formula brusa è questa e quindi aumento l'inform la informazione per poter arrivare a identificare e a caratterizzare il mio ione di conseguenza la molecula che lo ha prodotto allora vediamo un po questo è uno spettere letter spray di una molecula piccola l'elettro spray come il maldi non formano frammenti quindi qui ho una molecula deprotonata lo vediamo sono in modalità negativa 205 quant'è il peso moleculare il peso moleculare se qui ho tolto un protone dovrò aggiungere un protone quindi se 205 il peso moleculare 206 come vedete alla non ci sono frammenti e vi dicevo poc'anzi se gli frammenti sono estri indispensabili per poter identificare la struttura allora da questo io trovo peso moleculare ho determinato il peso moleculare 206 posso andare a vedere in una banca dati quante molecole note ci sono con peso moleculare 206 guardate quante ce ne sono in una banca dati magari in altra ce ne sono ancora di più e quindi questo vuol dire che circa 100.000 molecole note non posso certo permettermi di identificare quale molecula io ci vorrebbero sarebbe praticamente impossibile allora io posso aumentare la specificità della mia analisi certo che posso posso usare l'alta risoluzione come si diceva settori elettrostatiche magnetico tempo di volo orbitrapp allora io posso misurare la massa curata non misuro più 205 ma misuro 205.1221 e da questo valore per mi permette di determinare la formula brusa del mio rione quindi ho ottenuto un'informazione in più quindi oltre al peso moleculare ho ottenuto anche la formula brusa è già ma molecole che hanno questa formula brusa in da 90.000 si va sempre intorno a 10 15.000 io sono interessato a determinare la struttura come sono legati questi atomi di cui ho determinato la formula brusa per fare questo mi servono i frammenti il oione insurgente non si frammenta l'elettro spray non frammenta perché è una tecnica soft ma io devo ottenere i frammenti per poter avere un'informazione strutturale e allora per ottenere i frammenti insurgente non si formano li devo formare nella zona degli analizzatori e quindi utilizzo quella che si chiama spettometria di massa tandem dove il tandem è riferito a due analizzatori qui vedete il settore magnetico il settore elettrostatico che sono appunto legati insieme l'aspect allora se io ho queste quattro molecole che hanno tutto lo stesso peso moleculare tutte la stessa formula bruta io voglio capire quale molecula corrisponde questo spetto di massa devo prendere il mio oione devo frammentarlo devo fare lo spetto vedete massa alla seconda lo spetto di massa tandem ecco i frammenti ci sono due frammenti che prima non c'erano studiando questi frammenti io posso studiando i loro i frammenti cercando di interpretare correttamente lo spetto di spettometria di massa tandem io risalgo alla struttura e quindi dico guarda che di queste quattro molecole possibili che io poteva avere quella di cui ho fatto lo spetto che ho in presente soltanto questa perché perché le altre hanno ovviamente spettori massa massa diversi e guardate queste tre molecole hanno tutte esattamente lo stesso peso moleculare tutte esattamente lo stessa formula bruta ma hanno una struttura diversa e vedete i loro spettori massa massa sono diversi lo spettore massa massa potremmo dire è come se fosse un'impronta digitale della struttura del nostro oione e allora ecco che prendo il no abbiamo determinato il peso moleculare la formula bruta isoliamo il nostro oione per romperlo lo facciamo collidere con un gas e si vengono appunto a formare i frammenti dallo esame dallo studio dei frammenti risalgo alla struttura del mio oione allora questo è uno spetto di un peptide ciclico vedete ho la molecula protonata 474 prendo questo oione lo vado a facco frammentare collidere con un gas guardate quanti frammenti tutti questi frammenti sono estremamente utili perché mi permettono di identificare la struttura vedete un oione meno 18 dovuso alla perdita di acqua quindi la mia molecula contiene almeno un ossidile e così diciamo si prosegue nell'interpretazione dei dati allora a questo punto conosco la moiamolecula incognita conosco il peso conosco la formula bruta con l'alta risoluzione la determinata conosco la sua struttura la determinata con la spettrometria di massa tandem cosa mi manca qual è la sua forma come sei fatto qual è la tua conformazione io conosco tutto di te tranne la tua conformazione se sei in una conformazione più compatta o se sei in una conformazione più distesa questo è anche questa informazione possiamo ottenerla con la spettrometria di massa utilizzando una tecnologia della spettrometria di massa che si chiama mobilità ionica in che cosa consiste consiste in un tubo lo vedete qua riportato dove c'è una serie di anelli di elettro di adanello che hanno un potenziale all'interno di questo tubo c'è un gas che va contro corrente rispetto agli ioni quindi va contro agli ioni quindi gli ioni procedono diciamo entrano all'interno di questo tubo hanno questo gas contro di sé e un po e risentono del potenziale ovviamente l'oione che è più compatto che espone una superficie minore al gas va più veloce quindi arriverà prima uscirà prima dal tubo il l'oione che invece o è più pesante o ha una forma molto più estesa espone al gas una superficie molto più grande fa molta più resistenza e quindi uscirà dopo allora con questo sistema guardate queste due molecole questa blu e questa rossa sono esattamente la stessa molecola che però ha due conformazioni diverse questa rossa è più compatta questa blu ha una conformazione più estesa queste due molecole hanno lo stesso peso molecolare la stessa formula brutta la stessa struttura tutto identico l'unica differenza è la forma allora con la mobilità ionica vedete ottengo un mobilogramma dove la forma la molecola più compatta questa che è rappresentata in rosso uscirà prima avrà un tempo di uscita minore la molecola che identica quella precedente ma una forma più distesa uscirà con un tempo maggiore e quindi con la mobilità ionica questo è lo stesso discorso vedete l'oione più compatto a un tempo di uscita di circa 2 mili secondi l'oione più esteso sono identici questi due ioni a un tempo di uscita molto più un po più lungo e allora con questo siamo partiti la volta scorsa nel nostro viaggio per identificare la nostra molecola incognita e abbiamo visto che con la spettrometrida di massa possiamo determinare il peso molecolare con la spettrometrida di massa in alta risoluzione possiamo determinare la formula bruta con la spettrometrida di massa tandem possiamo determinare la struttura con la mobilità ionica possiamo determinarne la forma e la conformazione allora alla fine abbiamo identificato la nostra molecola e sappiamo come si fa questo è l'approccio che viene utilizzato in tutte le analisi che vi ho mostrato anche all'inizio in tutti gli ambiti da quello alimentario a quelle ambientale da quello clinico dai beni culturali nella biologia nelle scienze romiche dappertutto questa è la fine del nostro viaggio introduttivo nella spettrometrida di massa vi ringrazio molto per l'attenzione che avete dedicato e diciamo vi lascio la mia mail se avete bisogno di qualsiasi informazione non esitate a contattarmi grazie ancora e buona giornata