 مطالعہ میں جو آخری ٹیسٹ ہم پرپروم کرتے ہیں اسے روبس نیس کا نام دیا جاتا ہے روبسٹ انگلیش ورد ہے کہ دھچکے کو برداشت کرنے کی قابل آپ کا مطالعہ ہے تو روبس نیس is the ability of your procedure to cater the variability or changes in the method یہ چینج اس کسم کی ہو سکتی ہیں اس کو ہم نے یہاں پرپروم کیا ہے کہ stability of test and standard samples and solution یعنی ٹائم کے ساتھ ہم ابزرف کرتے ہیں کہ اگر ایک standards کو ہم نے آج اپلائے کیا ہے تو اونی standards کو ہم دو دن کے بعد ایک ہفتے کے بعد یا within two weeks اپلائے کر رہے ہیں تو کیا standards وہی value present کریں گے یا اس میں changes آجائے گی یعنی ٹائم کے ساتھ stability میں کو difference آ رہا ہے یہاں ہمارے standard اس مطابق سٹیبل رہیں گے اگر ایسا نہیں ہوتا تو method validation ہم یہ بات لکھی دیکھتے ہیں کہ اپنے standard کو fresh بنائے یا within one hour استعمال کیجئے یا two days سے زادہ استعمال نہ کیجئے یہ ان کی validity ہمیں mention کرنے کی ضرورت ہوتی اس طرح reagents کسی ایک خاص supplier کے ہماری ضرورت ہوں گے یا reagents کو ویری کیا جائے مختلف suppliers کے reagent اگر ایک دفعہ آپ مرک کے standards استعمال کر رہے ہیں دوسری مرتبہ سگمہ کے standard استعمال کر رہے ہیں تو آپ کا method ایکی جیسے result reproduce کر رہا ہے یہ اس میں changes آ رہی ہیں اس کو observe کرنے کے لیے بھی ہم reagents کے different suppliers کو لیکر analysis perform کرتے ہیں تیسری چیز کہ اگر ہم hplc پر testing کر رہے ہیں تو SPECIFICALLY ہمہا columns چینج کر کے دیکھ سکتے ہیں کہ c18 column بہت ساری variety کے موجود ہیں جن کی cost میں بھی variation ہے ان کی compactness میں بھی variation ہوگی تو c18 column ہی اگر ہم نے use کرنا ہے تو مختلف companies کے بنے column یا micrometer میں جو size mention کیا گیا ہے اس کو ویری کرنے سے فرق پڑتا ہے اگر یہ فرق پڑھا ہو ہمارے اس method اتنا روبس نہیں ہے کہ columns کو change کرنے سے اس کی change یا اس variation کو برداش کر سکے تو پھر ہمیں method میں یہ بات mention کرنے کی ضرورت ہوگی کہ کونسا column یا SPECIFICALLY کس کمپنی کا column استعمال کیا جائے extraction time یعنی کتنی دیر پہلے extraction کرنا ضروری ہے جب ڈیر پہلے extraction کی ضرورت ہے extraction time یا کتنی دیر کیلئے extraction اگر آپ نے solution کو soak کر کرنا ہے تو 5 منٹ کے لیے رکھیں گے 10 منٹ کے لیے رکھیں گے کتنی منٹ کے لیے اس کو sonicate کریں گے یہ times ہم ویری کرکے دیکھتے ہیں کہ ہمارا extraction method کون سوالہ بہتر ہے یا کس time duration میں وہ بہتر result produce کر رہا ہے variation in ph of mobile phase اگر آپ کا method روبسٹ ہے تو عم طور پہ وہ تھوڑا بہت ph میں variation کو برداش کر لیتا ہے 9.5 ph سے 9.6 یا 9.4 ph ہو جائے تو عم طور پہ method کو tolerate کر لینا چاہیے لیکن اگر آپ کا method اس سے بھی زیادہ sensitive ہے تو پھر ہم اس میں 9.5 zero plus minus point zero one point zero five یہ limitations بھی لگا سکتے ہیں اس ویریفائے کرنے کے بعد مخترح ph کے standards بنا کر یہ اپنی mobile phase کی ph value کو چینج کرکے ہم اس یہ results لیتے ہیں اور repeatability کے results پھر mention بھی کرتے ہیں variation in mobile phase composition mobile phase composition سے مراد hplc میں کیا 30 70 ratio for example اگر آپ نے لکھی ہے تو اس 30 70 میں کچھ variation آپ کو method برداشت کر سکتا ہے یا نہیں یعنی 70.0 اور 30.0 آپ کی requirement ہے یا 30 70 approximate ratio بھی آپ کی results کو validate ہی رکھے گی اس میں زادہ variation نہیں لے کر آئے گی اس بات کو بھی ہم mobile phase کی variable compositions کے ساتھ یعنی 30 70 کی بجائے 65 35 یا 75 25 کے ساتھ بھی اپنے results کو validate کرکے دیکھتے ہیں اور ویریفائے کرتے ہیں کہ اس میں یہ variation برداشت کر سکتا ہے یا نہیں جیسے گا پر temperature variation ہمارا method tolerate نہ کرے وہاں پر باز وقات ہمیں کسی خاص temperature پر اپنے analysis کو perform کرنا پڑتا ہے اس کے لیے column oven استعمال ہوتے ہیں تو column کو 40 degree centigrade پر 35 degree centigrade پر یقینیں یہ temperature جو room temperature سے زیادہ ہو تاکہ ایک جیسے ہی method کو یا ایک جیسے temperature کو ہر جگہ اچیف کیا جا سکتا ہوں وہاں ہم یہ بھی سپیسفائے کرتے ہیں کہ temperature tolerate کر سکتا ہے یا نہیں اگر 40 degree centigrade آپ کی method کا actual temperature ہیں تو اس میں plus minus 2 degree centigrade کی variation perform کر کے ہم اپنے results کو repeatable results اور ان کی precision کو observe کرتے ہیں and the last the flow rate column میں mobile phase کے چلنے کا flow rate differ کرتا ہے جیسے 1 ml per minute اگر آپ کے method کا result ہے تو آپ اس کو تھوڑا بہت variate کر کے any 1.1 or 0.9 ml per minute ان چیک کرتے ہیں کہ کیا پھر بھی ہماری peaks اسی شارپنس کے ساتھ یا separation کے ساتھ آرہیں ہیں جیسے actual method میں آرہیں تھی یا اس کے change کرنے سے وہ peaks آپ اس میں merge ہو جاتی ہیں یا ان کی separation بہتر نہیں رہتی اگر ہمارے method اتنا روبس نہ ہو تو ہم یہ sensitivity کے ساتھ اپنے method کے اندر mention کرتے ہیں اس آخری slide پر انس کو mention کیا ہے کہ آپ یہ method validation کی guidelines ic h کی guidelines ہے international conference for harmonization ایسے گوگل پر اگر ہم سچ کریں تو method validation of anotical procedures ان کو ان web site سے لیا بھی جا سکتا ہے اور follow کرنے کے لیے کسی بھی method پر اپلائے کرنے کے لیے ناملی pharmaceutical applications میں تو regular یہ چیز استعمال ہوتی ہے اس کے علاوہ بھی کسی anotical method کو validate کرنے کے لیے ہم any recommendations کو جو ic h کی guidelines ان کو استعمال کر سکتے ہیں