 Bonjour à tous, je me présente Frédéric Dounour, je suis pharmacien et je travaille avec Mireille au niveau de son équipe de recherche, donc InSERN 1239. Je fais également partie avec moi-même luskiba et qui je travaille du centre de référence. Donc je vais me parler un petit peu de formulation, c'est-à-dire de la conception des médicaments à partir de vitamines des chiens. Tout d'abord un petit peu d'histoire pour vous dire que la vitamine D, enfin les travaux ont commencé il y a relativement longtemps puisque ça a été les propriétés de l'huile de foie de muru ont été découvertes par, j'espère pas écorcher son nom puisque c'est un allemand chutz a été découvert en 1824. On me dit en S.A. et donc ça a été utilisé pour ces propriétés donc vous avez une petite affiche là qui montre et qui fait la promotion de l'huile de foie de muru. Il a fallu attendre les années 1919 pour que la vitamine liposoluble soit identifiée par Edward Melendie et c'est qu'en 1932, Cadolphe Windows, isolent la vitamine D et en 1934 la vitamine D3. Donc ici vous avez les deux vitamines, la vitamine D2 et D3 donc l'ergot calciférol et le colé calciférol qui sont très proches, elles ne diffèrent que au niveau d'une double liaison qui est située au niveau de la partie qui est en jaune. Alors quand on parle de vitamine D, si on reprend un petit peu la nomenclature internationale, en vérité la vitamine D c'est un ensemble de molécules, je vous ai mis, alors regardez pas parce que je pense que ça a un grand intérêt, ici l'ensemble des molécules qui sont classées comme vitamine D. Et donc le terme vitamine D c'est un terme général qui décrit tous les stéroïdes qui présentent qualitativement une activité biologique qui correspond au calcidiole. Les sources de vitamine D donc elles sont essentiellement apportées non pas par l'alimentation comme on pourrait le penser mais surtout par synthèse endogène. Les apports alimentaires ça représente 10% des apports de vitamine D donc ça reste quelque chose qui est quand même marginal par rapport à la synthèse endogène qui représente 90% des apports. Je vous ai mis aussi les taux de conversion entre les unités et les nynigrammes afin que vous représentiez ce que représentent les apports. Souvent, si on prend des ampoules, pardon, souvent quand on regarde les ampoules par exemple du V-dose à 100 000 unités on pourrait s'attendre à une quantité importante de vitamine D et absolument pas elle contienne 2,5 milligrammes seulement ce qui représente les 100 000 unités. Vous avez deux vitamine D qui sont très utilisés et vous avez la colé calciférole et l'ergo calciférole et en vérité elles diffèrent effectivement par une double léson mais elles diffèrent également par leur origine. Le colé calciférole a une origine animale alors que l'ergo calciférole est d'origine fungique. Donc les champignons sont aussi un apport de vitamine D surtout s'ils ont été exposés aux UV et à la lumière. Pour reprendre un petit peu le métabolisme de la vitamine D, je vais vous exposer après toute la partie on va dire photosynthèse donc on va surtout regarder la fin du graphique. Vous avez deux sources comme je disais de vitamine D, vous avez la synthèse putanée et l'alimentation. Donc la vitamine D c'est une molécule ou des molécules qui sont fortement liposoluble et donc vous avez un stockage important au niveau du tissu adypeux. Mireille Castanet parlait effectivement des personnes qui ont une IMC importante et je pense que un des mécanismes qui explique les besoins de vitamine D supplémentaire est lié à un captage par les tissus adypeux et une plus faible disponibilité pour le foie. Au niveau du foie comme je pense que vous me savez vous avez une première hydroxylation qui va être suivie d'une deuxième hydroxylation au niveau du rein pour obtenir la forme active qui doit être hydroxylée en 1 et en 25. La voie de dégradation ça va être une oxidation qui va être réalisée par les cytochromes et là encore Mireille a souligné le fait que qu'on utilisait des inducteurs enzaimatiques on devait augmenter les apports de vitamine D tout simplement parce qu'on augmente la dégradation de la vitamine D par cette cytochrome. Maintenant la synthèse cutanée plutôt photosynthèse cutanée tout d'abord c'est un mécanisme qui est entièrement physique il n'y a pas d'intervention d'enzyme c'est quelque chose qui se pourrait se produire si on met du DHC c'est à dire du hydrocholestérol si on expose aux UV et à température naturellement ça evoluera vers une synthèse d'argot calciférol. La première étape ça va être une photoconversion de ce dérivé du chocholestérol qui va être induite par les UV. Attention il faut des UV B avec une longue ordonnance de 280 et 315 si vous allez sur des radiations qui sont au UV A c'est à dire avec des longueurs d'ondes plus courtes ça sera ça sera péjoratif ça sera contre productif et donc ces UV vont entraîner un clivage au niveau du dérivé du chocholestérol et une ouverture de la liaison C9-C10. Cependant ce dérivé reste encore photosensibles et donc si vous avez une exposition trop longue aux radiations UV vous allez continuer à faire du clivage et du remodlage c'est à dire que l'exposition solaire est bénéfique une exposition solaire trop importante inactive la vitamine D qui aura été enfin la prévitamine D qui aura été synthétisée. Cette molécule doit encore subir une isomérisation thermique. Là encore c'est un équilibre physico-chini entre deux conformations qui sont possibles et cette isomérisation est simplement conduite par la température. La température idéale pour cette isomérisation est 37 degrés. Ici vous avez c'est un article qui est assez ancien parce que c'est les travaux qui remontent à plus de 40 ans. Nous avons étudié cette isomérisation en fonction de la température et on s'aperçoit qu'à 0 degrés vous avez quasiment pas d'isomérisation alors qu'à 37 elle est importante et à 25 elle est intermédiaire. C'est quelque chose qui met du temps à se produire. Vous avez un délai de trois jours. Dans des conditions physiologiques elle est accélérée tout simplement parce que vous avez une affinité de l'ergot calciférole pour l'alpha et l'oluline plasmatique et donc vous avez un espèce de déplacement de l'équilibre qui oriente l'équilibre vers la synthèse de l'ergot calciférole. L'effacteur qui influence cette synthèse putainée, Mireille a commencé à les éloquer. Vous avez d'abord la mélamine qui ralentit effectivement la conversion du dérivé du cholestérol, du DHC, vers la prévitamine D3. Vous avez bien entendu la localisation géographique. Les tropiques, vous avez une augmentation de l'exposition au UV. Vous avez également l'angle de pénétration d'aluminaires, c'est-à-dire qu'entre une exposition en pleine journée ou une exposition le soir avec un soleil déclinant, vous n'avez pas la même quantité du UV. Pareil entre l'hiver et l'été. L'été est beaucoup plus favorable à la photosynthèse alors que l'hiver vous avez une quantité du UV qui est moins. Après, comme je vous l'ai souligné, vous avez le temps d'exposition également qui est très défavorable, enfin qui est favorable si il est court et défavorable si il est long. Ici, vous avez un tableau qui reprend en fonction des types de peau. Le type 3, c'est une peau claire, un type 5, c'est une peau foncée avec des zones géographiques qui sont différentes avec l'équateur et Boston et le temps d'exposition qui est conseillé. Juste 30 secondes, on fait une intervention technique. On a un salle des haut-parleurs dans la salle. Vous savez peut-être moi qu'il faut qu'il m'en approche. C'est le witty, c'est la raison. Oui, je vais essayer de me rapprocher. Tout ça pour dire qu'effectivement quand on est sur une zone de forte exposition aux UV, il faudrait un temps plus court et ce temps devrait être plus long si la personne a une peau pigmentée. Ici, je vous ai listé l'ensemble des molécules qui sont disponibles actuellement sur le marché français. Je pense que vous connaissez ces molécules et ces spécialités. Vous avez l'ergot calciférol, l'esthérogile, le colé calciférol avec les doses et les imadées, le calcifédiol avec l'hydrogile, l'alpha calcidiol avec le 1 alpha et le calcitriol avec le rocaltrol. Si on regarde un petit peu les données de pharmacosynétiques, on s'aperçoit que l'ergot calciférol et colé calciférol sont des molécules qui ont des temps de midi, qui sont relativement longs puisqu'on s'aperçoit que le temps de midi se situe entre 15 et 40 jours et si on va vers les dérivés qui sont proxilés, on a une augmentation de hydrophilie qui est limitée mais qui permet d'avoir des molécules qui sont moins lipofiles et là, vous avez des temps de midi qui sont relativement plus courts avec le calcifédiol qui se situe aux alentours de 20 jours et le alpha calcidiol et le calcitriol qui ont des temps de midi qui se situe autour de la journée ou de quelques heures. Quand je parle de l'hypophilie, la solubilité de l'ergot calciférol, c'est du nanogramme par emel alors que le calcitriol, on va sur du microgramme par emel. L'absorption de la vitamine D2 et D3 sont des molécules qui sont fortement lipofiles, qui sont généralement associées, qui vont s'associer dans le bol alimentaire avec des graisses et donc vous avez besoin de former ce qui s'appelle des mycel, donc c'est des micro gouttelettes de lipides qui sont pris en charge par les selbilières et ces micro, toutes petites gouttelettes vont être après absorbées au niveau de l'intestin grelle proximale et donc qui a absolument nécessaire d'avoir ces selbilières pour l'absorption de la vitamine D. Les propriétés physico-chimiques, comme je vous disais, l'ergot calciférol et collé calciférol sont deux molécules qui sont fortement lipofiles, qui sont de véritables cailloux puisque c'est des molécules qui sont absolument pas solubes dans l'eau, on parle de nanogramme par emel, c'est quasiment insoluble, c'est des molécules qui se présentent sous forme de poudre, se dissolvent très très bien dans les solvents organiques type éthanol ou dans les graisses et c'est des molécules aussi qui sont instables et on reviendra. Donc l'instabilité de ces molécules, comme on l'a vu, vous prenez du DHC et naturellement il évolue si vous l'exposez au soleil et à la température vers l'ergot calciférol. Donc c'est des molécules qui sont naturellement instables et qui vont être soumises à misomérisation thermique, adloxidation et de la photoconversion. Donc il y a une difficulté galénique à formuler des systèmes qui soient stables et qui se tiennent dans le temps. Ici je vous ai repris des données d'une étude qu'elle a été conduite aussi il y a quelques années puisque elle est quasiment 40 ans. C'est une étude de stabilité en condition ICH. Ça correspond à des conditions standardisées qui évaluent la stabilité de la molécule et si on reprend par exemple l'ergot calciférol dans des conditions d'humidité on s'aperçoit qu'à 25 degrés à 85% d'humidité au bout de 56 jours il vous reste à peu près 98% de la dose alors que si vous allez vers le collé calciférol qui est un petit peu plus stable vous avez au bout de 2 mois que 88% de la dose qui reste. Sur les standards industriels ce qui est autorisé c'est 5%. Déjà ici si vous prenez ce système là avec ce taux d'humidité là, gardez votre poudre c'est pas stable. Deux mois ça ne correspond que aux standards qualité de l'industrie pharmaceutique. Donc il y a nécessité de développer des systèmes pour stabiliser la molécule. Toujours dans les études de stabilité il y a aussi un autre paramètre qui va être le contenant puisque vous avez des interactions qui sont contenues et donc le fait d'utiliser une ampoule verte c'est pas utiliser un mystère allu c'est pas du tout la même chose et vous avez des interactions c'est à dire que le support peut absorber de l'oxygène et favoriser une utilisation. Il peut contenir des traces de métaux lourds et aussi favoriser certaines réactions et donc quand on est avec des molécules qui sont particulièrement sensibles il est important d'étudier ces interactions. Ça a été conduit et le système le plus favorable est les systèmes plastiques. Alors c'est quelque chose qui est assez surprenant la même surprise quand j'ai trouvé ces résultats puisque généralement les molécules instables ont tend plutôt vers le ver qui correspond au système pour retrouver avec les ampoules du vable du védos par contre on a aussi les petits flacons plastiques donc je pense que tous ces systèmes sont utilisables mais les études des études contenant contenu doivent être absolument réalisées. Donc la classification bio pharmaceutique des principes actifs c'est quelque chose qui permet qu'il met les principes actifs enfin qu'il éclasse en quatre catégories en fonction de si c'est une molécule qui est solue ou pas et est-ce que c'est une molécule qui est bien absorbé ou pas. Donc les systèmes les plus faciles à développer sur le plan pharmaceutique c'est les systèmes solues qu'on aille une absorption importante ou pas c'est les systèmes qu'on développe le plus facilement après le système qui est un petit peu plus compliqué c'est des systèmes avec une solubilité qui est faible mais avec une forte perméabilité et ça c'est le cas de la vitamine D et les systèmes les plus complexes ça va être faible solubilité et une faible perméabilité et un titre d'exemple vous pourras citer la citose porine qui rentre dans cette catégorie et là vous avez généralement des variations individuelles qui sont importantes et il suffit de rajouter une molécule qui a marge thérapeutique et croite et là on est objet passé par des dosages. Donc les formes galéniques disponibles donc elles se résument on va dire à quatre formes vous avez tous les systèmes qui vont être plus vables qui vont être soit présentés sous forme d'ampoule ou de flacons d'outes vous allez avoir des solutions injectables, des capsules moles et ça représente les quatre systèmes que vous allez retrouver et donc on va revenir dessus pour voir un petit peu comment ils ont été développés et quelles sont les compositions excitandaires. Si on commence par les formes liquide orale qui sont les formes bien entendu les plus adaptées chez l'une voné et chez les enfants en bas âge je rappelle que les formes type comprimé gélules capsules moles sont utilisables à partir de l'âge de six ans et donc ces systèmes liquide sont indispensables chez les patients plus jeunes qui permettent également une adaptation de la dose et donc on discutait un petit peu avant de la valeur de la goutte et justement c'est intéressant de disposer ces systèmes d'ajustement à la goutte pour essayer d'aller sur la dose adaptée aux patients donc la définition de la solution c'est la préparation liquide qui est obtenue par 10 solutions du ou des principes actifs dans l'eau ou dans d'autres solvents ou un mélange de solvents. L'intérêt de ces systèmes là c'est d'avoir un temps d'absorption qui est plus court par rapport à une forme sèche même si c'est quelque chose qui est moins intéressant pour la vitamine D cependant il présente un certain nombre de limites ça va être le principe actif doit être soluble dans le solvant voilà sinon c'est une suspension et ça génère d'autres problèmes et puis c'est quelque chose qu'on soulignait tout à l'heure avec le calcidose qui est des caractéristiques organo-léptiques doit être agréable notamment chez l'enfant pour éviter un refus de la prise de la dose donc là encore c'est des éléments qui peuvent être travaillés le terme consacré c'est la palabilité du système et donc c'est il est tout à fait possible d'utiliser soit des agents masquants soit faire un pelliculage d'une forme solide pour pour masquer la rôme il ya énormément de moyens galéniques pour travailler ces aspects sur les formes liquidorales vous avez différentes spécialités vous avez retrouvé le l'esthérogile donc c'est l'ergot calciférol et donc ils ont solubilisé la vitamine D dans de l'éthanol pour améliorer sa stabilité les ampoules fortement dosés sont stabilisés par de l'azote le flacon compte goutte on se retrouve également avec un apport d'éthanol ils ont été obligés de rajouter un anti oxidant qui est de l'hydroquinone sur les autres formulations si vous allez sur le v-dose là ils ont choisi de développer un système ils ont solubilisé la vitamine D dans des lycérides dans des dérivés huileux et ils ont également travaillé sur le goût puisqu'ils ont rajouté de la saccharine qui est un enduit pour donner un petit goût sucré et ils ont rajouté un petit gros citron la vitamine D eux aussi ils sont passés par un système de solubilisation dans l'huile le goût est un petit peu différent puisque eux ils ont choisi plutôt un goût orange et ils ont rajouté de la vitamine E pour stabiliser la vitamine D on parlait tout à l'heure de l'adrivile ils sont aussi passés par une solubilisation dans des corps gras sur lesquels ils ont rajouté un anti oxidant qui est le butyl hydrotoluène qui est un anti oxidant qui est hypossoluble de l'acide sorbique qui lui est utilisé comme agent de conservation plus anti-microliens et vous avez également un arôme citron qui a été mis le dédrogile calcifédiol eux ils ont choisi de solubiliser la vitamine D dans un solvant c'est pas de l'éthanol c'est du propylenglicol c'est quelque chose qui est hydrophile qui permet enfin qui a permis de solubiliser l'argot calcifédiol si on va vers les dérivés qui sont plus hydrosoluble de la vitamine D comme l'alpha calcidiol eux ils sont passés sur une solubilisation sur une solution àqueuse la solution àqueuse amène un certain nombre de contraintes cette solution àqueuse ils ont été obligés de rajouter un conservateur anti-microbien qui a un parabène qui est à l'intérieur et puis ils ont rajouté de l'alcool pour améliorer la solubilité qui contribue aussi à la conservation anti-microbienne et vous avez un tampon qui a été fait avec de l'acide citrique et ils ont rajouté également du sorbitol cette solution doit être absolument conservée au réfrigérateur à l'abri de la lumière il y a également des systèmes captsul molle c'est des systèmes vous avez une petite photo ici c'est généralement des petites capsules qui sont brillantes toujours de l'huile et donc les capsules molles se définissent comme des préparations solides pour situer d'une enveloppe molle de formes et de capacités variables qu'on pense généralement une dose unitaire de principes actifs l'enveloppe comme les capsules durs c'est à dire les gélules est composé de gélatine sur lesquelles on ajoute d'autres substances qui sont des plastifiants pour donner si vous prenez une gélule elle est assez dure et quand vous faites des capsules molles il faut que ça soit plastique donc on rajoute du glycérol pour amener cette propriété cette forme cette forme galénique n'est pas adaptée aux enfants de moins de six ans parce qu'elle nécessite une bonne dégulation alors comment c'est fabriqué alors c'est une forme galénique qui est assez assez complexe et qui est un petit peu plus difficile à fabriquer que les gélules vous avez ici une photo d'une machine qui permet de les fabriquer avec le schéma de fonctionnement qui se trouve ici vous avez besoin de de solutions concentrées de gélatine et également une solution huileuse qui contient le principe actif vous avez deux rouleaux sur lesquelles et déposer la solution concentrée de gélatine qui est chauffée et donc ça devient quelque chose ça fait évaporer l'eau et ça devient quelque chose qui devient solide ces deux rouleaux ces deux films sont apportés vers deux mâchoires qui est équipé d'un injecteur qui va injecter une dose d'huile dans au niveau des deux rouages qui vont former on arrêtait le deuxième micro donc je disais qu'il y avait un injecteur qui allait injecter une solution huileuse au niveau de mâchoires qui prennent les deux films et qui ferme la capsule la capsule va être formée au niveau de ses roues dentées et reste encore fragile puisque elle doit être encore séchée pour renforcer la la dureté de la capsule de l'enveloppe donc vous avez un certain nombre de capsules molle qui sont qui sont disponibles sur le collé calciférol vous avez le typos qui est dosé à sans minimité donc la formulation est relativement simple puisqu'on dit sous le collé calciférol dans l'huile de maïs et puis vous avez l'un alpha et le rocaltrol où là vous avez des formulations qui sont également à base d'huile et qui inclut un anti-oxydant vous avez également de disponibles des solutions injectables donc je dirais que la définition de solution injectable c'est une préparation stérile destinée à être injectée dans le corps humain elle nécessite ou peuvent nécessiter l'emploi d'un certain nombre d'excipients pour assurer l'isotonie ajuster le pH augmenter la solubilité permettre la conservation du pa et éventuellement également présenter une action antimicrobienne elles sont conditionnées dans des récipients adaptés et les solutions stériles sont préparées par mise en solution d'utéa soit dans de l'eau soit dans un liquide stéril non aqueux ou un mélange des deux les solutions injectables présentent obligatoirement en plus de la stérilité une autre propriété qui est l'impedité ce qui explique que les conditionnements qui sont utilisés pour les préparations injectables sont transparents dans la mesure du possible pour que l'infirmière puisse vérifier l'absence de particules si c'est possible vous avez en préparation par anterrale l'un alpha là encore c'est une formulation qui qui a été faite dans de l'eau puisque c'est un principe actif qui est plus hydrophile et cette formulation vous avez rajouté dans un tampon citrate comme elle était comme le solvant est de l'eau ça apporte une contrainte au niveau de la stabilité puisque cette solution devrait être conservée impérativement au réfrigérateur à deux et à plus suite de gré et bien entendu protéger de la lumière dans le laboratoire de pharmacie galénie qui est qui est rattachée à l'équipe inserm 1239 on a travaillé sur on a commencé à travailler sur sur la vitamine d et je vais juste vous montrer quelques quelques résultats préliminaires et donc on maîtrise et noametskiba est un grand spécialiste des technologies cyclotxtrines qui a un excipient particulier qui permet de complexer les principes actifs donc les complexes dans quoi dans des cages moléculaires qui sont composés d'oligosaccharides cyclic qui ont été obtenus par hydrolyse enzymatique de l'anido ces cages moléculaires sont des formes d'antonoire dont l'intérieur est l'hypophile et l'extérieur hydrophile donc l'utilisation de ces produits là permet en faisant entrer le principe actif à l'intérieur de la cyclo de rendre solubles des produits qui ne l'étaient pas et de stabiliser des produits qui étaient instables et donc on a commencé à faire des essais préliminaires notamment un essai de dissolution qui a été conduit en ayant complexé le collé calciférol dans de la cyclo d'extrime qu'on a mis ensuite dans des gélules et on a fait un essai de dissolution qui permet de caractériser la libération du principe actif donc là en l'occurrence du complexe mais également de sa forme pharmaceutique de la gélule donc l'essai de dissolution vous avez la machine qui est représentée juste ici permet de mimer les conditions physiologiques qu'on retrouve au niveau du tube digestif et d'étudier la possibilité de l'absorption en partant du postulat que ce qui est libéré est absorbé comme c'est une classe 2 on peut et qu'il n'y a pas de problème d'absorption les essais de dissolution sont un bon modèle et donc quand on a réalisé ce premier essai de dissolution on a pu montrer qu'il y avait une libération qui était importante puisqu'on avait quasiment une libération flash de 40% et puis ça montait progressivement à 60 à 68% d'absorption des dosages ont été réalisés en HPLC et donc la forme gélule peut être une forme intéressante en alternative au capsule mole tout simplement parce qu'elles sont plus simples à fabriquer et on évite également les problèmes organo-éthique liés à une odeur ou un goût désagréable de manière beaucoup plus simple que d'ajouter un arôme voilà juste pour conclure je vais vous remercier pour votre attention et une petite image un peu humoristique sur le travail des galinistes