 انکرومیٹگرافی now we will discuss ڈائپس of کرومیٹگرافی تقریباں پانچ مختلف قسم کی کرومیٹگرافی تیکنیکس جن کامیہ تسکرہ کریں گے اور یہ کرومیٹگرافی تیکنیکس صرف hvlc کے لیے نہیں ہے بلکہ کولم کرومیٹگرافی اور gc گیس کرومیٹگرافی میں بھی انہی کا استعمال ہوتا ہے اتزوپشن کرومیٹگرافی، پارتیشن، آین اکسچینج، سائز اکسلیان، یا جل پرمییشن اور افنیٹی کرومیٹگرافی یہ ایک دفرنٹ تاپس of کرومیٹگرافی آدیر ایک ایک دسکس کریں تو اتزوپشن کرومیٹگرافی سب سے پہلی تاپ ہے جیسے آپ کو اس فورگراف کے ذریعے بھی سمجھا گیا ہے کہ یہ سرفسز ہیں، سولیٹ سرفسز جن پر ہمارے سلوٹ کی مولیکوز اتزوپ ہوں گے اتزوپشن کی ایکلیبریم پر آنے کی کنڈیشن مختلف ہوں گے کون سے والے زادہ اتزورب ہوں گے دیفنٹلی وہ دپن کرے گا کہ کمیسٹری کیا ہے ان سرفسز کی جیسے ہم نے سب سے پہلے سی اٹین یا سی ایٹ کا تذکرہ کیا تھا تو اگر اس طرح کے نون پولر سرفسز ہیں تو دیفنٹلی نون پولر سبسٹرانس اٹیچ ہوں گے اور پولر نسبتن رول آوٹ کرتے جائیں گے اگر پولر سرفسز ہیں تو پولر سبسٹرانس اس پہ اٹیچ ہو جائیں گے اور نون پولر اس سے رول آوٹ ہو جائیں گے اٹزوپشن کرمیٹگرافی اس پہلی one of the oldest ڈاپ of کرمیٹگرافی اٹ ڈیٹلائز مبال لیکوٹ اور گیسیس فیس that is adsorbed on to the surface of a سٹریشنری فیس the equilberation between the مبال and سٹریشنری فیس accounts for the separation of different solutes یعنی یہ hplc میں بھی استعمال ہوگی جیسے لیکوٹ مبال فیس اور گیسی میں بھی استعمال ہو سکتا ہے جیسے گیسیس مبال فیس دوسری تیپ کی کرمیٹگرافی پاٹیشن کرمیٹگرافی ہے پاٹیشن کی ایک open ڈیولر کولم اس وقت دکھایا گیا ہے اس طرح کے کولم عام طور پہ ہم گیس کرمیٹگراف میں استعمال کرتے ہیں بہت باریک لائننگ ہے تیوب کی اور اس کے سرفس کے اوپر ایک لیر لیکوٹ کی بھی دپوزٹ ہوئی ہے جب امرہ سلیوٹ کی مالیکیول اس میں سے پاس کرتے ہیں تو ایکلیبریم اسٹابریش ہوتا ہے کچھ مالیکیول اٹیچ ہو جاتے ہیں کچھ اس میں سے پاس out کر جاتے ہیں تو جو اٹیچمنٹ اور اس پاس اس ایکلیبریشن کی بیسس پہ ہمیں کچھ مالیکیول ٹائم ٹائم ٹ of the کولم ڈیولیٹ ڈیولیٹ ڈیولیٹ ڈیولیٹ ہو جاتے ہیں دس this form of ڈیولیٹ گرافیی is based on a thin film formed on the surface of a solid spot by a liquid stationary phaseสلیوٹ applearet between the mobile phase andair stationary liquid phase یہی فین�aapنا اگر ہم کولم کراہمٹ گرافی میں استعمال کریں جہاں پر SOLID SUPPORT میں مختلف particoest موجود ہوں گے اور جب کوئی LID Clinicalے catastrophic پاس کریں گے نیشلی جس سوم ٹ٤ woke ایکلیبریم اسٹابلش کریں گے اور کچھ اس لکوٹ سے ایٹاچ ہو جائیں گے کچھ نکلتے جائیں گے یہ لکوٹ لکوٹ کرمڈگرافی یا پارٹیشن کرمڈگرافی کی تاپ ہو سکتی ہے یعنی ایچ پیلسی میں بھی اور جسے یہ اپنٹیولر کالم ہے تو جیسی میں بھی اس پارٹیشن کرمڈگرافی کو استعمال کیا جاتا ہے ایٹاکشن کرمڈگرافی ہے another طاپ ہم نے اس سے پہلے سلکہ کے ساتھ بائنٹ اوکسجن اور اس کو دسکلس کیا تھا کہ سی اٹین ایک لوم چین کاربن کی اٹاچ ہے اسی کے اخر میں اگر اسو ٹھری ایچ کی فوم میں یقینہ نگیٹی فوم میں اسو ٹھری ایچ اگر نگیٹی بائن موجود ہے اور کوئی پوسٹیف چارجت آئنز پاس کریں گے تو اس کے ساتھ اٹریکٹ ہو گے اس کے ساتھ زاد آفینٹی شو کریں گے اگر اسی طرح کے سی اٹین کالم پر انڈ پر تر ب انڈ پر انڈ پر انڈ پر پوزٹیف یعنی امونیم اٹاچ کر دی جائے تو نگیٹی وائنس اٹریکٹ ہو گے اور پوزٹی وائنس اس میں سے پاس ہوت کرتے جائیں گے اس طرح کی کرمڈگرافی کو ہم آئن ایکسچینج کرمڈگرافی کہتے ہیں جس میں ہماری سلکہ جل یا انڈ ترمینل جنسے کاب کیے ہیں وہ خود پولر ہیں آئنک ہیں ان پے چارجز ہیں اور وہ چارج پارٹیکلس کو اپنے ساتھ اٹاچ کر لیں گے باکنوں کو نکلنے گے ان this ڈائپ کرمڈگرافی ڈیوز اف ریزنز the stationی solid phase is used to covenlly attach an ڈائنس اور ڈیٹ ڈائنس on it salute ڈائنس of the opposite charge in the mobile phase are attracted to the reasons by electrostatic forces اسے آئن ڈائنج کرمڈگرافی کہتے ہیں مالیکولر ڈائنج کرمڈگرافی اسے جل جل پرمییشن، جل فلٹریشن بھی کہتے ہیں یہ جیسے آپ دیکھ رہے ہیں کہ اس کولم کے اندر کو سولیٹ پارٹیکلز ہیں جو اڈزاپٹ سرفیسز ہیں سلکہ کے ان کے سائزیز کی وجہ سے درمیان میں سپیسز بن جاتی ہیں اور ان سپیسز سے نکلتے ہوئے جو سائڈز اند بنتے ہیں چھوٹی چھوٹے ہولز بنیں گے وہاں پہ سمول مولیکول سر ٹراب ہو جائیں گے لیکن بگر مولیکول اس میں سے پاس ہوتے جائیں گے تو ہم اس پرمییشن میں دیکھ رہے ہیں کہ اس تصویر میں بگر بڑا کرکے دکھائے گا ہے کہ سمول پارٹیکلز ٹراب ہو گئے ہیں جبکہ بگر مولیکول اس میں سے پاس آوٹ ہو رہے ہیں اسے جل پرمییشن کہتے ہیں while passing through a porous gel molecules separate according to their sizes the pores are normally small and allow smaller molecules to enter the gel the large molecule pass through the column at a fast rate affinity chromatography عام طور پر کرمیی گے طائب بگر مولیکول کو سپرٹ کرنے کے لیے پروٹینز کے مولیکول کو سپرٹ کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے this is the most selective type of کرمیڈگرافی اٹیٹ لائز the specific interaction between one kind of solute مولیکول and a second molecule that is immobilized on its stationary phase immobilized یعنی جو سٹری کر رہا ہے سٹریشنی فیس کے ساتھ رکا ہوا ہے وہ ان مولیکول کو اپنے ساتھ ٹریک کرے گا for example the immobilized molecule may be an antibody to some SPECIFIC PROTEIN اور SPECIFIC PROTEINS اس انٹی بارڈی کے ساتھ ٹریکٹ ہو کر رکھ جائیں گی باقی unwanted proteins اس میں سے نکل جائیں گی when solute containing a mixture of proteins are passed by this molecule only the SPECIFIC PROTEIN is reacted to this in an antibody binding it to the stationary phase this protein is later extracted by changing the ionic strength or pH جیسے فٹوگراف میں دکھایا ہم نے کہ یہ مختلف کسم کی پروٹین مولیکول جنے مختلف سائز اور شیپ کے کیوب اور ٹرائنگل کی صورت میں دکھایا ہے جب انہیں ہم پاس کرتے ہیں اپنے اس انٹی بارڈی سے فل ہوئے کولم پر تو یہ تمام کی تمام بہر نکل آتی ہیں صرف ایک SPECIFIC PROTEIN کی اس کولم کے ساتھ بائنٹ ہو جائے گی اور جب ہم سلوشن کی pH چینج کریں گے یا کوئی خاص لیگنڈ اس میں سے پاس out کریں گے تو وہ لیگنڈ اس SPECIFIC PROTEIN کو اپنے ساتھ اٹریک کر کے لیے آئے گا اس طرح کی طاپ کو اپنیٹی کرمڈوگرافی جس میں پہلے ہم نے unwanted particles کو یا proteins کو اس میں سے فلٹر out کیا اور پھر جو ریکوائیٹ تھا اس کو ہم نے اس کے بات use کیا choice of column ڈیفنٹ لی ہم کس کسم کی کرمڈوگرافی استعمال کر رہے ہیں اگر hvlc تو عام طور پہ c18 یا c8 کولمز استعمال ہوتے ہیں اس طرح and capped with sulfate یا s3h یا ammonium and capped with cyanide and capped with ammonium یا nitro group یہ مختلف کولمز استعمال کیا جاتے ہیں تو این کولمز کو ہم اس طرح اگر gc کریں تو اس کے اندر ہم open tubular column استعمال کرتے ہیں تو مختلف کسم کی طاپ میں یا ہم proteins کی separation کرنا چاہتے ہیں تو SPECIFIC طاپ کے کولم کی ضرورت ہوگی ان کولمز کو استعمال کرتے ہوئے جس کسم کے analyte کو آپ سپرٹ کرنا چاہرے ہیں جس کسم کی کرمڈوگرافی کا سہارہ لے رہے ہیں تو ان دونوں چیزوں کو match کرتے ہوئے ہمیں اپنیٹ کرمڈوگرافیٹ ٹیکنیک اور کولم کو choice کرنے کی ضرورت