 ہم کہنا بہت بیر لم دکرا لہو۔ جانتےہ مدول میں ملے دیکھا ہے۔ عربنے ہمیں حیرتہ رہنا ہے حیرتہ اور حیرتہ ہے جہرے ڈسری کے انوز پروپوشن میں ہے۔ اور اس مدول میں ہم بیسیکلی بننے جا جو ایمفیسائس کریں گے، عربنے اور ایم کی حیرتہ سالنے کی کامنے soletion کو بھی ہے۔ حیرتہ برکتے ہیں بہت پسام تجی کامنے کے بہت سے مقینیمہ مقینی میں لیتی ہے ، اس سے ہم لیمڈر میکس کہتے ہیں ویولنٹ میکسیمم اور اس سے پہلے مدول میں ہم نے اس کو دسکس کیا تھا کہ اس ویولنٹ میکسیمم پر کون سے فیکٹرس اثرنداز ہوتے ہیں یعنی مختلف کسم کی شفٹs جیسے باتھو کرومک شفٹ یا ہیپسو کرومک شفٹ جسے ریٹ شفٹ یا بلو شفٹ کہتے ہیں تو کیسے پیگ ایک جگہ سے دوسرے جگہ شفٹ ہو سکتی ہے ویولنٹ میکسیمم کیوں چینج ہوتی ہے اس کی کمیسٹری کو ہم نے دسکس کیا تھا اور اس وقت جو ہیپسو کرومک شفٹ یا ہیپسو کرومک شفٹ یعنی کنسنتریشن کی ویرییشن سے ابزاربنس پر فرق پڑتا ہے ہم اس ریلیشن شفٹ کو دسکس کرنا چاہرے ہیں در آٹو مین کریکٹسٹکس of an absorption بینٹ one is its position and second one is its intensity in last module we have دسکسٹ that position depend upon energy that is equal to required for the electronic transition یعنی یہ اس کی کمیسٹری بھی دپنٹ کرے گا کہ ایک مولیکول کس جگہ پر ابزارب کرے گا اگر کمیسٹری بدل دیں گے تو اس کی position چینج جائے گی لمڈر میکس یا ہیسٹ پیک کس جگہ پر آری ہے وہ position بدل جائے گی and second one is intensity یعنی کتنی ہیٹ پر پیک آئے گی that correspond to number of molecules کس جگہ پر ابزارب کرے گا اگر ایک مولیکول میں ایک سیزادہ کرومو فور موجود ہیں اور وہ ایک دوسرے کے ساتھ کنجوکیشن میں بھی ہیں جیسے دبل بانٹ بھی ہے اور ایک کاربنائل گروب بھی ہے ایلفا بیٹا ان سیچوریٹٹ کاربنائل کمپونٹ میں تو ہمیں ناملی دو پیکس کی بجائے صرف ایک سنگل پیک ملتی ہے جو ان کی کمبائنٹ رلیشن کی وجہ سے آتی if کرومو فور سار سیپریٹٹ بھائی ات لیسٹ دو سنگل بانٹ یعنی وہ کنجوکیشن میں نہیں ہے آیسولیٹٹٹ بھی بھے کر رہے ہیں تو اس صورت میں ہمیں دو مختلف پیکس مل سکتی اگر ایک ہی کرومو فور ایک سیزادہ پہ موجود ہے جس سے دائی کاربوکسلی کی ایسٹس یا دائی کاربنائل کمپ کنٹیننگ کمپونٹس تو وہ دو نو کرومو فور اپنی انٹنسٹی کو مرش کر لیں گے اور پیک تو ہمیں ایک ہی جگہ پہ ملے گی ویبلنٹ سیم رہے گی possibility اس کی انٹنسٹی بڑھ جائے گی ہم نے دسکس کیا تھا کہ ابزاربنس اور ٹراسمیٹنس ایک دوسرے کے انورس رلیشن میں جیسے سے ٹراسمیٹنس کم ہوتی ہے یعنی 100% ٹراسمیٹنس پہ ابزاربنس زیرو ہے لیکن اگر ٹراسمیٹنس چینج ہو کر موف کرتی ہے زیرو پرسن کی طرف مطلب آپ کا مولیکول یا سلوشن کنسنٹیٹٹ ہوتا جا رہا ہے اور اس مجھے ٹراسمیٹ ہونے والی لائٹ کی کنسنٹیشن بہت کم ہو گئی ہے تو ابزاربنس میکسیم کو اپروچ کر جائے گی اور جس stage پر آپ کو میکسیم ابزاربنس مل گئی پھر وہاں سے یہ کیلیپشن کرف ان کے درمیان ایک سٹیٹ لائن ریلیشن رہنے کی بجائے جسے ہم ابزاربنس اور کنسنٹیشن کے درمیان درک پوپوشن کہتے ہیں اس کی بجائے ہم ایک سٹیٹ لائن اس کنسنٹیشن والے ایکسس کے اگین اگینسٹ ملنا شروع ہو جائے گی یعنی میکسیم ٹراسمیٹنس اچیب ہو گئی اب اس مل سے کوئی مولیکول یا لائٹ ٹراسمیٹ نہیں ہو رہی تو اس سے زیادہ ابزاربنس بڑھ نہیں سکتی اس کا مطلب یہ ہے کہ کیلیپشن کرف ایک لیمٹ تک تو ہم اس سٹیٹ لائن شو کرتی ہے لیکن اگر ہم کنسنٹیشن بڑھاتے جائے تو پھر یہ سٹیٹ لائن کی بجائے پیرابولا شیپ میں آجائے گی جیسے اس پیک نے بھی اپنا کرف بنالی ہے ابزاربنس اور کنسنٹیشن نمالی سٹیٹ لائن ایک خاص لیمٹ تک یہ ہم لور لیمٹ میں جب سلوشنز بناتے ہیں تو ان کی ابزاربنس اور کنسنٹیشن ایک دوسرے کے علاین رہتے ہیں دیریکٹ پوپوشن میں رہتے ہیں اس کا مطلب بکہ ہم اس سٹیٹ لائن ملے گی اور سٹیٹ لائن کی جو ایکوشن ہے ویز ایکول تو ایمکس پلس سی اس کو فولو کر رہا ہوگا وی یعنی ابزاربنس ایم یعنی سلوپ اف لائن x کی جگہ x x اس پر ہمارے پاس کنسنٹیشن ہے اور سی جسے ہم نمالی وائی انٹرسپٹ کہتے ہیں اور چونکہ یہ سٹیٹ لائن کرف عام طور پہ زیروں سے پاس ہوتی ہے اس لئے نمالی سی کی ویلیو زیروں ہی آتی تو وائی از ایکول تو ایمکس اس کو ہم سلوپ کر کے کسی اننون سیمپل کی ابزاربنس لینے کے بعد اس کی کنسنٹیشن یا x نکال سکتے ہیں سلوپ ایم کے لیے یہ جو ہماری سٹیٹ لائن کی ایکوشن تی ایز ایکول تو ایف سلون سی ل اس کا مطلب ہے ہم تو سی اور ایک درمیان ریلیشن چپ سٹیٹ کر رہے ہیں تو ایف سلون ل یہ سلوپ ہے لائن کی اور لہست اس جاننہ مدور میں ہم نے دسکس کیا تھا کہ پات لینت ڈل ٹائٹ دیدالمیٹر ڈل ٹائٹ کی صورت میں فکس کر دیا گیا ہے اس لیے سلوپ آف لائن بیسی کلی یہ ایف سلون کو رپریدن کر تی سلوپ آف لائن دپنک کرے گی کہ آپ کامسا مالیکول استعمال کر رہے ہیں جیسے کیم اینہ فور کیلی سلوپ مختلف ہو سکتی ہے پٹاشیم دیا کرو میٹ کیلی مختلف ہو سکتی ہے کوئی ویٹمین ایہ یا اور اگانی تو ان کے لئے سلوپ میں ویریشن آسکتی ہے اور کسی دو کمپاون کی سلوپ سیم بھی آسکتی ہے لیکن концentration اور absorbence کے درمیان ریلیشنچپ یہ سٹیٹ لائن ہی رہے گا اسے ہم بیر لمبرٹ لاؤ گیتے ہیں اور اس طرح کی سٹیٹ لائن سے ہم ان نون سیمپل کی концentration بہت آرام سے find out کر سکتے ہیں so analysis of unknown can be done by using calibration curve of known concentration solution پہلے ہم wave length maximum find out کرتے ہیں اس کے لئے ہم عام طور پہ wave length scan یا spectrum mode پہ کام کرتے ہیں اور پھر اس خاص wave length کے اوپر absorbence اور концentration یعنی مختلف концentration کی سلوشن بنائے کر اور ان کی absorbence لے کر ہم سٹیٹ لائن کردرہ کرتے ہیں جسے ان ان کی концentration نکال سکتے ہیں